如何得到双重基因敲除小鼠

1. 如何得到双重基因敲除小鼠

得到双重基因敲除小鼠需要经过专业的胚胎发育敲除。基因敲除是用含有一定已知序列的DNA片段与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组,整合至受体细胞基因组中并得到表达的一种外源DNA导入技术。它是针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏蔽，并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。有此类业务需要的可以联系苏州赛业。赛业生物已服务全球数万名科学家，产品和技术已直接应用于包括CNS（Cell，Nature, Science）三大期刊在内的学术论文。除了提供基因敲除、基因敲入、条件性基因敲除模型定制服务外，赛业生物还有专业的手术疾病模型团队，可以提供多种复杂精细的小动物手术疾病模型；药物筛选评价小鼠平台可以提供从欧美行业领袖引进的免疫缺陷鼠、用于心血管及阿尔茨海默症等研究的人源化小鼠；国际标准化无菌鼠技术平台可以提供无菌鼠、无菌动物定制服务、微生物菌群移植服务等基于无菌动物模型的各类产品和服务，结合赛业生物成熟稳定的基因编辑小鼠平台，还可帮助您研究菌群与基因的互作机制。

2. 有没有TLRs基因敲除的小鼠

基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型，在生命科学、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用。基于胚胎干细胞的基因打靶技术、EGE技术（基于Crispr cas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的？ 一、 基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程： 1. 课题设计，订购课题BAC菌； 2. 按照课题设计，完成打靶载体设计和构建； 3. 将重组载体电转到胚胎干细胞中，用G418筛选转染后的胚胎干细胞，得到阳性克隆； 4. 进一步通过PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆； 5. 将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中，并植入到假孕小鼠的子宫内； 6. 得到嵌合鼠，并获得F1阳性杂合子小鼠。 基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，而且其周期长工作量大。 二、 利用EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠的流程 1. 设计构建识别靶序列的sgRNA; 2. 设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒； 3. 利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA/Cas9进行活性检测； 4. 设计构建打靶载体； 5. 体外转录sgRNA/Cas9 mRNA; 6. 小鼠受精卵原核注射sgRNA/Cas9 mRNA和打靶载体； 7. 获得Fo代小鼠，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定； 8. 获得F1代小鼠，利用PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定。 虽然EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，其实不然，EGE技术（基于Crispr cas9技术）系统构建简单，基因敲除/敲入效率高，速度快，可实现多基因、多物种基因敲除/敲入，最快2个月即可得到F0代阳性鼠，5个月得到F1F1代杂合子小鼠。

3. neo 在小鼠基因型鉴定中起什么作用

neo 在小鼠基因型鉴定中起什么作用
基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型，在生命科学、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用。基于胚胎干细胞的基因打靶技术、EGE技术（基于Crispr cas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的？
一、 基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程：
1. 课题设计，订购课题BAC菌；
2. 按照课题设计，完成打靶载体设计和构建；
3. 将重组载体电转到胚胎干细胞中，用G418筛选转染后的胚胎干细胞，得到阳性克隆；
4. 进一步通过PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆；
5. 将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中，并植入到假孕小鼠的子宫内；
6. 得到嵌合鼠，并获得F1阳性杂合子小鼠。
基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，而且其周期长工作量大。
二、 利用EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠的流程
1. 设计构建识别靶序列的sgRNA;
2. 设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒；
3. 利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA/Cas9进行活性检测；
4. 设计构建打靶载体；
5. 体外转录sgRNA/Cas9 mRNA;
6. 小鼠受精卵原核注射sgRNA/Cas9 mRNA和打靶载体；
7. 获得Fo代小鼠，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定；
8. 获得F1代小鼠，利用PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定。
虽然EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，其实不然，EGE技术（基于Crispr cas9技术）系统构建简单，基因敲除/敲入效率高，速度快，可实现多基因、多物种基因敲除/敲入，最快2个月即可得到F0代阳性鼠，5个月得到F1F1代杂合子小鼠。

4. 如何制备双基因敲除小鼠

基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型，在生命科学、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用。基于胚胎干细胞的基因打靶技术、EGE技术（基于Crispr
cas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的？
一、
基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程：
1.
课题设计，订购课题BAC菌；
2.
按照课题设计，完成打靶载体设计和构建；
3.
将重组载体电转到胚胎干细胞中，用G418筛选转染后的胚胎干细胞，得到阳性克隆；
4.
进一步通过PCR和southern
blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆；
5.
将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中，并植入到假孕小鼠的子宫内；
6.
得到嵌合鼠，并获得F1阳性杂合子小鼠。
基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，而且其周期长工作量大。
二、
利用EGE技术（基于Crispr
cas9技术）制备基因敲除小鼠的流程
1.
设计构建识别靶序列的sgRNA;
2.
设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒；
3.
利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA/Cas9进行活性检测；
4.
设计构建打靶载体；
5.
体外转录sgRNA/Cas9
mRNA;
6.
小鼠受精卵原核注射sgRNA/Cas9
mRNA和打靶载体；
7.
获得Fo代小鼠，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定；
8.
获得F1代小鼠，利用PCR和southern
blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定。
虽然EGE技术（基于Crispr
cas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，其实不然，EGE技术（基于Crispr
cas9技术）系统构建简单，基因敲除/敲入效率高，速度快，可实现多基因、多物种基因敲除/敲入，最快2个月即可得到F0代阳性鼠，5个月得到F1F1代杂合子小鼠。

5. 如何在NCBI中进行基因序列比对，比如小鼠p53基因与人类p53基因的比对

首先找到小鼠和人类p53基因的序列，然后进ncbi首页，里面靠右的位置popular resources下第一个选项“blast”，打开以后，找“nucleotide blast”。进到那个页面有个框就是让你输序列的，如果要比对两个序列的话，要勾选下面的一个小的单选框“Align two or more sequences ”。就会出现两个框，分别输入人和小鼠的序列。点最下面大大的“blast”按钮，就可以了。

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6. 特异性敲除鼠为什么可以通过鼠尾检测

将重组载体电转到胚胎干细胞中基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和物研发领域不可或缺的实验动物模型。基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术. 课题设计. 获得F1代小鼠. 利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA/Cas9进行活性检测； 7、EGE技术（基于Crispr cas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术； 4;Cas9 mRNA； 5； 2，利用PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定. 得到嵌合鼠. 小鼠受精卵原核sgRNA/. 按照课题设计，完成打靶载体设计和构建; 2，基因敲除/，用G418筛选转染后的胚胎干细胞. 体外转录sgRNA/。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的，得到阳性克隆;敲入效率高，速度快;敲入，可实现多基因，最快2个月即可得到F0代阳性鼠. 进一步通过PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，在生命科学; 6. 设计构建打靶载体； 3. 获得Fo代小鼠，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定； 3. 设计构建识别靶序列的sgRNA，其实不然； 4、 利用EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠的流程 1，5个月得到F1F1代杂合子小鼠、人类医和健康研究领域中发挥着重要的作用、 基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程. 将胚胎干细胞阳性克隆到小鼠囊胚中。基于胚胎干细胞的基因打靶技术？一，并获得F1阳性杂合子小鼠，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆，EGE技术（基于Crispr cas9技术）系统构建简单： 1； 5。虽然EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，而且其周期长工作量大，订购课题BAC菌. 设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒； 8;Cas9 mRNA和打靶载体，并植入到假孕小鼠的子宫内； 6。二、多物种基因敲除/

7. 什么是balbc小鼠

BALB/C小鼠
特征与用途：
◇ 繁殖期长，生产性能好
◇ 乳腺肿瘤发病率低（病毒诱发可增高），对慢性肺炎敏感，常有动脉硬化，对放射线照射极为敏感
◇ 常用于单克隆抗体腹水，用于肿瘤学、生理学、免疫学、核医学等方面研究

8. crispr怎样打靶rna病毒

课题设计； 5，而且其周期长工作量大. 获得Fo代小鼠. 体外转录sgRNA#47； 6. 获得F1代小鼠;Cas9进行活性检测，可实现多基因. 设计构建识别靶序列的sgRNA； 2； 5。虽然EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，并获得F1阳性杂合子小鼠. 设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒，利用PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定; 6;； 4； 7； 3，5个月得到F1F1代杂合子小鼠;，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆： 1，速度快，得到阳性克隆;Cas9 mRNA，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定; 2。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的，用G418筛选转染后的胚胎干细胞； 3，基因敲除#47； 4，并植入到假孕小鼠的子宫内、EGE技术（基于Crispr cas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术. 按照课题设计. 将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中、 利用EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠的流程 1;敲入效率高. 进一步通过PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选. 得到嵌合鼠，最快2个月即可得到F0代阳性鼠、 基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程;Cas9 mRNA和打靶载体;，其实不然？一、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用； 8;敲入. 利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA#47，订购课题BAC菌。基于胚胎干细胞的基因打靶技术，EGE技术（基于Crispr cas9技术）系统构建简单将重组载体电转到胚胎干细胞中基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型. 小鼠受精卵原核注射sgRNA#47。二，在生命科学，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，完成打靶载体设计和构建。基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术、多物种基因敲除#47. 设计构建打靶载体